تعیین نیمه کمی میزان بیان mRNA اینترفرون گاما با استفاده از روش RT-PCR
Authors
Abstract:
Cells communicate with one another not only by cell-cell contact, but also via the elaboration of soluble mediators or cytokines. The functionally distinct repertoire of secreted cytokines of Th1/Th2 cells has been shown to play an important role in the pathogenesis of inflammatory diseases. Effector Th1 cells secretes predominantly IFN- γ and IL-2 and regulates cell-mediated immunity against intracellular pathogens. Regulatory cytokines are likely to be secreted in small quantities in response to specific stimuli and taken by responder cells. As a result, many scientists determine cytokine’s m-RNA expression by using a more sensitive technique, RT-PCR. The expression of IFN- γ -mRNA was studied using semiquantitative RT- PCR. Lymphocytes were stimulated by phytohaemagglutinin (PHA) (1μg/106) in culture medium (incubation time: 0,4,8,12,24,48 and72 hour) and total RNA extracted and cDNA synthesized. IFN- γ was detected by the RT-PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction) and semi-quantitative-RT-PCR methods, in which sequences (273bp) between two oligonucleotide primers (chosen from two exons of the IFN- γgene sequences) were amplified using a heat-stable DNA polymerase. In semi-quantitative RT-PCR we used a serial dilution (1/2,1/4…) of cDNA in order to determine the titer of cDNA for that will give visible band in 2% agarose gel electrophoresis. Results showed that after 4h incubation express highest level of IFN- γ- mRNA and it is stable until 24 hour after that. Then it falls to baseline level. In order to study the IFN- γ gene expression kinetic compare results with other studies show that RT-PCR detection of IFN- γ level is more sensitive than other methods like Elisa and for maximum expression of IFN- γ gene 4h incubation of lymphocytes with PHA is sufficient.
similar resources
تعیین نیمه کمی میزان بیان mrna اینترفرون گاما با استفاده از روش rt-pcr
سایتوکاینها واسطه های شیمیائی هستند که از سلولهای سیستم ایمنی ترشح شده، و بر سلولهای دیگر یا خود سلول ترشح کننده اثر می کنند. بیان متفاوت ژن سایتوکاینها در بدن مشخص کننده نوع پاسخ ایمنی (از نوع th1 یا th2) است که خود این پاسخ متفاوت می تواند نقش مهمی در پاتوژنز بیماریها داشته باشد. از عمده ترین سایتوکاینهای سلولهای th1 می توان به ifn-γ و il-2 اشاره کرد. که در پاسخهای ایمنی علیه پاتوژنهای داخل س...
full textImproved mRNA quantitation in LightCycler RT-PCR.
BACKGROUND Real-time polymerase chain reaction (PCR) utilizing the LightCycler and similar systems is an increasingly used technique for quantitative reverse transcription (RT)-PCR of mRNA levels from genes of immunologic interest. A commonly encountered limitation with these systems is that the fluorescence induced by SYBR Green (a fluorophore that binds double-stranded DNA) can result from pr...
full textمطالعه بیان ژن ureI هلیکوباکترپیلوری به روش RT-PCR
سابقه و هدف: هلیکوباکترپیلوری یک ارگانیسم مارپیچی شکل و گرم منفی بوده که عامل زخم معده است و نقش مهمی در ایجاد سرطان معده دارد. اجزای مختلف اوره آز، از عوامل مهم برای تحریک سیستم ایمنی هستند. هنوز واکسن موثری علیه این باکتری وجود ندارد و تحقیقات در زمینه یافتن واکسن، ضروری به نظر می رسد. هدف از تحقیق حاضر، ایجاد سازواره ژنی بر اساس ژن ureI و بررسی بیان آن است. مواد و روشها: در این مطالعه تجربی...
full textReproducibility in the quantification of mRNA levels by RT-PCR-ELISA and RT competitive-PCR-ELISA.
The use of reverse transcription (RT) PCR for relative quantitation of gene transcripts relies on the reproducibility of the individual RT, PCR and product measurement steps. Semi-competitive RT-PCR (RT-cPCR) uses an internal competitor template in the PCR step to improve quantitation. We have surveyed the reproducibility of RT, PCR, RT-cPCR and measurement, amplifying the glyceraldehyde-3-phos...
full textاندازه‌گیری نیمه کمی میزان آلبومین با استفاده از روش بهینه شده ایمونوکروماتوگرافی و نانوذرات طلا
full text
بررسی میزان بیان تعدادی از ژنهای دخیل در سرطان در چند رده سلول سرطانی مختلف به روش RT-PCR
چکیده فرم تغییریافته و یا جهشیافته ژنها یا همان پروتو انکوژنها، مسئول ترویج رشد و تکثیر کنترلنشده سلولی میباشند. تجمع جهش در ژنهای مختلف و خاص، در طول زمان منجر به سرطان میشود. الگوی بیان ژن (امضا مولکولی)، برای هر کلاس از سلولهای توموری اختصاصی است. این مقاله آخرین روش نظارت بر بیان یک پانل از ژنهای خاص سرطانی را شرح میدهد. روش real-time PCR براساس عملکرد کمی رنگ SYBR GReen، بهطور و...
full textMy Resources
Journal title
volume 10 issue 2
pages 5- 11
publication date 2003-09
By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.
No Keywords
Hosted on Doprax cloud platform doprax.com
copyright © 2015-2023